在制药、生物科技等高标准行业中，洁净区的环境控制是确保产品质量与安全的核心环节。臭氧灭氧作为一种高效、无残留的消毒技术，在D级洁净区得到了广泛应用。然而，要确保其有效性与安全性，必须遵循一套严格的D级洁净区臭氧灭菌标准。本文将深入探讨该标准的核心参数、验证方法、操作要点，为您提供一份清晰、实用的实践指南。

一、 什么是D级洁净区及其环

境控制要求？

根据药品生产质量管理规范（GMP）的定义，洁净区按照空气中悬浮粒子的洁净度等级进行划分，通常分为A、B、C、D四个级别。D级洁净区是洁净级别最低的区域，主要用于最终灭菌药品的洗瓶、配料、灌装前器具的准备，或非无菌制剂的生产等风险相对较低的操作。

尽管风险较低，D级洁净区的微生物污染控制同样不容忽视。它作为进入高洁净度区域的缓冲地带，其环境微生物水平直接影响着整体洁净系统的稳定。因此，对D级洁净区进行定期、有效的灭菌，是维持GMP合规性与生产环境稳定的基础要求。

二、 为什么选择臭氧作为D级洁净区的灭菌方式？

在多种消毒技术中，臭氧（O₃）因其独特的优势，成为D级洁净区常用的灭菌选择。

• 广谱高效：臭氧是一种强氧化剂，能够迅速杀灭包括细菌、病毒、真菌孢子和芽孢在内的多种微生物，具有广谱杀菌能力。

• 无残留污染：臭氧在完成灭菌后，会自行分解为氧气（O₂），不会产生任何有毒有害的化学残留物。这对于要求严苛的洁净环境至关重要，避免了二次污染的风险。

• 渗透性好：作为一种气体，臭氧能够扩散到洁净区的各个角落，包括设备缝隙、过滤器表面以及空气处理系统等难以通过擦拭或紫外线照射消毒的“死角”，实现全方位、无死角的空间灭菌。

• 操作便捷：通过集成的臭氧发生器和控制系统，可以实现灭菌过程的自动化，减少了人工操作的依赖和潜在的错误。

三、 D级洁净区臭氧灭菌的核心标准与参数

要达到理想的灭菌效果，必须对灭菌过程中的关键参数进行精确控制。这些参数共同构成了D级洁净区臭氧灭菌标准的核心内容，通常以“CT值”（浓度×时间）作为衡量指标。

1。 臭氧浓度（Concentration）

臭氧浓度是影响灭菌效果的首要因素。浓度过低，无法有效杀灭微生物；浓度过高，则可能对设备材料造成过度氧化损害，并增加后续去除的难度与时间。

• 实践建议：对于D级洁净区，空间灭菌的臭氧浓度通常建议控制在 20–40 ppm（百万分率）的范围内。具体数值需通过前期的灭菌效果验证来确定。

2。 灭菌时间（Time）

灭菌时间指的并不是臭氧发生器运行的总时长，而是指洁净区内臭氧浓度达到并维持在目标浓度水平的持续时间。

• 实践建议：在达到目标浓度后，通常需要维持 60–120分钟 的作用时间。同样，确切的时间应基于验证研究结果。

3。 相对湿度（Relative Humidity）

湿度对臭氧的灭菌效果有显著影响。研究表明，较高的湿度可以增强臭氧的杀菌能力，因为水分子有助于臭氧穿透微生物的细胞壁和细胞膜。

• 实践建议：在进行臭氧灭菌时，建议将环境相对湿度控制在 70%–85% 之间。在干燥环境下，灭菌效果会大打折扣。因此，在灭菌前可能需要通过加湿系统来调节湿度。

4。 温度（Temperature）

温度会影响臭氧的稳定性。温度越高，臭氧分解成氧气的速度越快，其半衰期越短，可能导致在达到灭菌效果前浓度就已下降。

• 实践建议：常规的洁净室温度（如18–26°C）通常适合臭氧灭菌。在此温度范围内，臭氧具有足够的稳定性来完成灭菌任务。

四、 臭氧灭菌效果的验证与日常监测

仅仅遵循参数设定是不够的，必须通过科学的验证来证明灭菌方案的有效性，并建立日常监测程序。

首先，在首次使用或发生重大变更后，必须进行严格的灭菌效果验证。这通常涉及使用生物指示剂（BI），例如将含有高抗性嗜热脂肪芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）的载体放置在洁净区内最具挑战性的位置（如房间角落、送风口远处、设备内部等）。灭菌后，通过培养这些指示剂来确认是否达到预期的杀灭对数（通常要求对芽孢达到log 3-4的杀灭率）。

其次，可以使用化学指示剂（CI）作为辅助手段，它能通过颜色变化直观地反映该位置是否接触到了足够剂量的臭氧，但它不能证明微生物被有效杀灭。

最后，在日常运行中，应建立环境监测程序。在臭氧灭菌并通风排残结束后，通过沉降菌、表面取样（接触皿）和空气浮游菌采样等方式，定期检查洁净区的微生物水平，确保环境始终处于受控状态。

五、 安全操作要点与残留去除

臭氧对人体具有毒性，高浓度臭氧会刺激呼吸道和黏膜。因此，安全操作是臭氧灭菌中至关重要的一环。

• 密封隔离：在灭菌期间，必须确保洁净区完全密封，所有人员均已撤离，并在入口处设置明确的警示标识。

• 浓度监测：灭菌过程中应使用在线臭氧传感器实时监测浓度，确保其维持在设定范围内。

• 残留去除：灭菌结束后，必须启动通风系统或专用的臭氧破坏装置（如催化分解器），将室内臭氧浓度降至安全水平以下（国家职业卫生标准要求，工作场所8小时时间加权平均容许浓度为 0.1 ppm）。

• 安全准入：在人员进入前，必须使用便携式臭氧检测仪确认空气中的臭氧浓度已达标，严禁在浓度超标的情况下进入。

D级洁净区的臭氧灭菌是一项科学而严谨的工作。它不仅依赖于先进的设备，更取决于对灭菌标准的深刻理解和严格执行。通过精确控制臭氧浓度、时间、湿度和温度四大核心参数，并结合科学的验证与日常监测，才能确保灭菌的有效性、可靠性与安全性，为符合GMP要求的生产活动提供坚实的环境保障。

为确保生产安全与产品质量，请务必根据您的具体设施和产品要求，制定并遵循经过验证的臭氧灭菌标准操作程序（SOP）。

常见问答（FAQ）

问1：臭氧灭菌后多久可以进入洁净区？

答：进入时间没有固定标准，关键在于室内臭氧浓度是否降至安全阈值以下（通常为0.1 ppm）。这取决于通风系统的效率、洁净区体积以及是否有臭氧破坏装置。短则30分钟，长则数小时。因此，必须使用经过校准的臭氧检测仪确认安全后，方可允许人员进入。

问2：臭氧会对D级洁净区内的设备或材料造成损害吗？

答：是的，长期或高浓度臭氧暴露可能对某些材料产生氧化损害，如天然橡胶、部分塑料和未经处理的金属。在引入臭氧灭菌系统前，应进行材料兼容性评估。对于敏感设备，建议选择耐臭氧腐蚀的材料（如不锈钢316L、特氟龙等），或在验证阶段评估其在设定灭菌参数下的耐受性。